La extensión y tinción de muestras para citologías forma parte del día a día de las clínicas y hospitales veterinarios.
Una buena extensión es tan importante como una buena toma de muestra.
Dependiendo de la muestra, del órgano, de su densidad y de lo que se quiera ver, se elegirá una técnica u otra de extensión.
Hay dos técnicas principales:
- En línea.
- Se coloca una pequeña cantidad de muestra biológica en el portaobjetos soporte.
- Se coloca el portaobjetos extensor sobre el soporte y se desliza hasta tocar la muestra.
- La muestra debe extenderse por capilaridad por todo el borde de portaobjetos extensor.
- Se realiza un movimiento rápido y uniforme.
- En squash.
- Se coloca una pequeña cantidad de muestra biológica en el portaobjetos soporte.
- Se coloca un portaobjetos extensor sobre el soporte, de forma perpendicular, realizando una forma de cruz.
- Se desliza suavemente.
Dependiendo del tipo de muestra y de la citología, se realizarán unas u otras técnicas de extensión:
- Citologías exfoliativas. Son aquellas muestras extraídas de forma no invasiva mediante el uso de hisopos, cepillos o por secreciones naturales consiguiendo células descamadas de forma natural.
- Con hisopo (ej.: citología de oídos). Se rota el hisopo o torunda sobre el portaobjetos, nunca se arrastra ni se presiona.
- Secreciones naturales (ej.: exudado vaginal). Se recoge una gota con un portaobjetos y se extiende por squash. Es un tipo de citología poco frecuente.
- Citologías líquidas. Se denominan así las citologías realizadas a los líquidos orgánicos: bilis, líquido pleural, peritoneal, pericárdico, LCR, sinovial y orina; en todos se necesita una muestra centrifugada para obtener una cantidad de células suficiente.
- Líquido muy celular (ej. exudado en derrame pleural). Se realiza la extensión directamente, sin necesidad de centrifugado. Se recomienda extensión en línea.
- Líquido poco celular (ej. orina). Se centrifuga durante 5 minutos a 1000rpm, consiguiendo un paquete celular que se pueda depositar en un portaobjetos; en este caso se extenderá por squash o en línea.
- Citologías por PAAF y PAF. PAAF significa punción y aspiración con aguja fina, se suele destinar a muestras líquidas o poco densas. Por otro lado, PAF significa punción con aguja fina, en este caso se utiliza para muestras densas y con alta probabilidad de sangrado. De forma habitual, es una técnica que se apoya en métodos de diagnóstico por imagen ya que suelen ser muestras de órganos internos (hígado, riñón, quistes profundos).
- PAAF con masas poco densas o líquidas (ej.: quiste). La veterinaria que realice la punción, aspirará suavemente para conseguir más muestra. Se deja caer suavemente una gota sobre un portaobjetos y se extiende por squash.
- PAF con masas densas (ej. absceso). No es necesario aspirar en este tipo de masas, sin embargo, al tener una consistencia densa no se puede depositar una gota, por lo que se necesita una jeringa de 5mL llena de aire para poder expeler con fuerza la materia que se haya quedado con la aguja.
La tinción más habitual en hospitales veterinarios es el panóptico rápido o Diff-Quick, gracias a sus ventajas: rapidez de tinción, protocolos sencillos, bajo coste y una aporta una amplia gama cromática que facilita la visión de las estructuras.
Consta de los siguientes pasos:
- Secado al aire.
- Fijación de la muestra. Se sumerge durante un tiempo acordado, que puede variar de pocos segundos a varios minutos. Esto dependerá del reactivo, del protocolo elegido y del grosor de la muestra. Por ejemplo: 30 segundos.
- Se escurre.
- Colorante ácido, comúnmente eosina. Se trata de un colorante que tiñe los citoplasmas y sustancias afines, de color rosáceo. Igual que con el fijador, se tiñe durante un tiempo concreto. Por ejemplo: 15 segundos.
- Se escurre.
- Colorante básico, comúnmente azul de metileno. Es un colorante que tiñe los núcleos y otras sustancias similares, de color azul oscuro. Del mismo modo que los reactivos anteriores, se elige un tiempo determinado. Por ejemplo: 15 segundos.
- Se escurre y se aclara con agua corriente hasta que deje de perder color.
- Se deja secar apoyado “de pie” sobre una superficie.
En todos los casos, tanto en la elección de la técnica de extensión (squash vs. en línea) como en los tiempos de tinción, se debe tener en cuenta las preferencias de la persona que va a realizar la interpretación.
