El frotis sanguíneo: preparación, identificación y recuento celular

RECOGIDA DE LA MUESTRA

La recolección de la muestra debe ser siempre de la misma manera, siguiendo un protocolo específico, para poder detectar una alteración y encontrar su causa.

De forma general, debe extraerse sangre venosa de un acceso común como la vena cefálica, safena o yugular; siempre con cuidado de que la muestra no se coagule ni se hemolice.

Una vez recogida la cantidad necesaria, se deben rellenar los botes dejando gotear por la pared sin movimientos agresivos. Es muy importante enrasar todos los botes, especialmente los de citrato sódico y EDTA.

Para las extensiones sanguíneas utilizamos la sangre que hemos depositado previamente en los tubos de EDTA. Mantiene en buenas condiciones la sangre a 4ºC durante 24h, aunque para las extensiones sanguíneas debe hacerse en las 2h posteriores a la extracción.

 

EL FROTIS

Es la extensión de una muestra con el fin de facilitar su observación microscópica. El objetivo es obtener una preparación monocapa de los elementos formes de la sangre.

El frotis se divide en tres partes principales:cabeza, cuerpo y cola.

 

LA TINCIÓN

El Panóptico rápido es la más frecuente en clínicas y hospitales veterinarios, se conoce comúnmente como Diff-Quik, que es su nombre comercial.

Se trata de una tinción de tres reactivos:
-Fijador, que es un tipo de alcohol.
– Colorante ácido: eosina. Tiñe partes básicas como el citoplasma.
– Colorante básico: azul de metileno. Tiñe partes ácidas como el núcleo.

Se debe seguir un protocolo de tinción siempre. Además hay que llevar un control de cuidado en los tintes: se deben filtrar para retirar los precipitados, cambiarlos cada cierto tiempo y limpiando los contenedores (dependiendo del uso). Los botes se deben cerrar siempre para evitar la evaporación, especialmente del fijador.

Otro tipo de tinción es la que se usa para reticulocitos, aunque hay varias tinciones, una de las más comunes en clínica es el nuevo azul de metileno.

 

EL MICROSCOPIO

La forma de conseguir enfocar fácilmente el microscopio es siguiendo estos pasos:

  1. Colocar el portaobjetos en la platina.
  2. Observar con el 4x y mover el macrométrico hasta el má
  3. Rotar el micrométrico para enfocar.
  4. Cambiar el objetivo al 10x y volver a rotar el micromé
  5. Repetir el paso 4 con el siguiente objetivo: 40x.
  6. Y de igual forma para cambiar al 100x.

El microscopio es un equipo muy utilizado en el laboratorio, por lo que se debe prestar atención a su cuidado y mantenimiento: siempre que se use el objetivo de inmersión (100x) hay que usar aceite. Al terminar: apagar la luz, colocar el objetivo más pequeño y bajar la platina. Si se ha usado aceite, limpiar el objetivo 100x.

 

LAS CÉLULAS SANGUÍNEAS

 

ERITROCITOS

Son las células más abundantes de la sangre. Son discos bicóncavos, de coloración rojiza y, dependiendo de la especie, una palidez central. Su tamaño medio es de unas 7μm. Con la tinción Diff-Quick se colorean de un tono uniforme entre rosa y morado.

 

LEUCOCITOS

Son las células de defensa del organismo. Su aumento (leucocitosis) puede estar relacionado con el aumento de todas las poblaciones celulares o solo de una. La leucocitosis más frecuente está provocada por neutrofilia por infecciones. Por otro lado, de igual forma ocurre en la disminución (leucopenia), normalmente causada por neutropenia o linfopenia.

Estos dos casos son fácilmente identificables en el frotis.

 

Neutrófilos
Son los leucocitos más abundantes, son la primera línea de defensa frente a los patógenos. Es una célula que mide entre 10 y 12μm, es redonda con un núcleo lobulado y gránulos muy sutiles. Con la tinción panóptica se colorea de un color neutro, entre rosa y morado.

El aumento se denomina “neutrofilia” y puede estar relacionada con excitación, estrés, infecciones o neoplasias, entre otros. Mientras que la neutropenia, que es el descenso, se asocia a alteraciones de la médula ósea, infecciones o fármacos.

Se pueden observar neutrófilos inmaduros, que tienen un núcleo en forma de C sin lobulaciones que se llaman “neutrófilos en cayado” o “en banda”.

 

Eosinófilos

Tienen un tamaño moderadamente mayor al de los NEU. Su citoplasma es ligeramente rosado con  un gran número de gránulos alargados de color rosa y el núcleo bilobulado. Sus funciones son la defensa ante los parásitos y la mediación en procesos alérgicos y reacciones de hipersensibilidad.

La eosinofilia se asocia a casos de hipersensibilidad alérgica, por parásitos o asma felino, por ejemplo. La población total de eosinófilos es muy reducida, por lo que un descenso en este número no es significativo.

 

Basófilos

Tienen un tamaño superior al de los neutrófilos y eosinófilos. Su citoplasma es azul-grisáceo con gránulos e color azul oscuro y de tamaño variable. Son muy raros de encontrar. Su papel es fundamental en las enfermedades alérgicas y frente a agentes infecciosos, especialmente los parásitos.

 

Monocitos
Son los leucocitos más grandes, su núcleo puede tener muchas formas, pero la más frecuente es la forma arriñonada. Tienen un citoplasma morado-grisáceo, con vacuolas (o sin ellas).

El aumento, monocitosis, está relacionado con procesos inflamatorios, infecciosos o neoplasias mientras que la monocitopenia no tiene relevancia diagnóstica.

 

Linfocitos

Son células redondas, en su mayoría son ligeramente mayores que los eritrocitos, pero estos leucocitos pueden adquirir diversos tamaños: grandes, medianos y pequeños. Tienen un núcleo muy grande para el tamaño total de la célula, es redondo y suele ser excéntrico. El citoplasma es muy escaso y de color pálido.

Su función única es la defensa del organismo, son la segunda población de leucocitos más abundante.

La linfocitosis se asocia a neoplasias o estimulación del sistema inmunológico por ataques de patógenos, especialmente. La linfopenia aparece en inflamaciones agudas o casos de estrés, por ejemplo.

 

PLAQUETAS

Son porciones de una célula más grande, llamada megacariocito. Son fragmentos esféricas (inactivadas) y con elongaciones (activadas) muy pequeñas, de color rojizo. A pesar de su minúsculo tamaño, ocasionalmente se pueden encontrar macroplaquetas, que son del tamaño de eritrocitos.

En el frotis se observará si hay agregados plaquetarios, que son aglomeraciones de plaquetas, que se tiñen de un tono más morado que las demás estructuras, algo muy frecuente en gatos.

 

LA OBSERVACIÓN

Para la observación de citologías, debe realizarse un screening sistemático. Se deben hacer varios tipos de observación:

  • A muy bajos aumentos (con el objetivo 4x):
    • Se realiza un barrido de la muestra para comprobar la calidad del frotis.
  • A pocos aumentos (con el objetivo 10x):
    • Se valora la distribución celular, cantidad de poblaciones, presencia o ausencia de artefactos y estructuras. Localizar la zona monocapa
  • A muchos aumentos (con el objetivo 40x):
    • Determinación de morfología y alteraciones en la serie roja.
    • Determinación de morfología, recuentos manuales de la serie blanca.
    • Determinación de morfología de la serie plaquetar.
  • En inmersión (con el objetivo 100x):
    • Alteraciones morfológicas más concretas, cambios tóxicos e intracitoplasmáticos y la presencia de parásitos intracelulares.
    • Si el recuento celular para la fórmula leucocitaria no es posible a 40x, se realizará con este

 

ATV. Técnico superior de Laboratorio Clínico y Biomédico

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